多肽是α-氨基酸 以肽链连接在一起而形成的 化合物。
分类:由两个氨基酸分子脱水缩合而成的化合物叫做二 肽,同理类推还有三肽、四肽、五肽等。通常由10~100氨 基酸分子脱水缩合而成的化合物叫多肽。它们的分子量低 于10,000Da(Dalton道尔顿)。由2~10个氨基酸组成的 肽称为寡肽(小分子肽);10~50个氨基酸组成的肽称为 多肽;由50个以上的氨基酸组成的肽就称为蛋白质。
1、生物合成方法
2、酶催化合成法
3、化学合成方法(包含液相合成和固相合成)
多肽固相合成
定义:
从C端(羧基端)向N端(氨基端)重复添加氨基酸的过程。
设计方法:
先将所要合成肽链的羟末端氨基酸(C端)的羟基以共价键的结构同一个不溶性的高分子树脂相连,然后以此结合在固相载体上的氨基酸作为氨基组份经过脱去 氨基保护基并同过量的活化羧基组分反应,接长肽链。重复(缩合→洗涤→去保护→洗涤→下一轮缩合)操作,达到所要合成的肽链长度,最后将肽链从树脂上裂解下来,经过纯化等处理,即得所要的多肽。
分类:
其中α-氨基用BOC(叔丁氧羰基)保护的称为BOC固相合成法,α-氨基用FMOC(9-芴甲氧羰基)保护的称为FMOC固相合成法,
固相多肽合成中,主要是通过检测树脂上游离氨基来判断连接效率,检测方法称为Kaiser方法,其检测结果,如果有游离氨基的时候,显示兰色,或红褐色(pro,ser,His)。
Kaiser试剂包括:
A,5%茚三酮的乙醇溶液
B,80%苯酚的乙醇溶液
C,2%0.001M KCN的吡啶溶液
配制中的吡啶需要经过茚三酮处理后,重蒸后再使用。检测过程,取少量树脂,加入A,B,C各2-3滴,105-110℃下加热5min,如果溶液有兰色,或树脂出现兰色,红褐色,表明还有游离氨基,否则说明连接完全。